Aspecte morfologice ale rinotraheitei infectioase bovine

<Abstract

The study presents 6 positive cases of infectious bovine Rhinotracheitis, morphlogical the investigations were carried out on a number of 206 samples of serum through the Elisa-Kit technique Testing IBR gB antibodies and 6 samples of brain and organs coming from the bovines with ELISA positive reaction at IBR-IPV confirmed also by IDSA Bucharest. In the necropsy we noticed: bronchopneumonia in different evolution stages, including the purulent one, areas of pulmonary extensive emphysema, hemorrhages, the degeneration of parenchymous organs in bovines, and in a calf we noticed an accentuated hyperemia of the snout - "the red snout disease" , unilateral keratitis, fibrino - hemorrhagic and purulent inflammation of the anterior respiratory and digestive tracts ways, necroses and some erosive-ulcerative lesions oral cavity, pharynx, and esophagus. The histopathological examination of the brain emphasized non- suppuration meningoencephalitis, more frequent and more severe in the young animals. The intranuclear, acidophilic viral inclusions have been obseved in the neurons and perivascular glial cells (astrocytes) at the level of the cerebral trunk and Ammon''s horn.

Key words:

ELISA, non-suppuration meningoencephalitis, viral intranuclear inclusions.

Rinotraheita infectioasa bovina este o maladie infectioasa, inalt contagioasa cauzata de herpesvirus Bovin 1 (BHV-1). In afara de bolile respiratorii, acest virus cauzeaza conjuctivita, vulvovaginita, avorturi, encefalita si infectii sistemice generalizate. Desi datele clinice pot sugera IBR, semnele respiratorii patologice nu sunt limitate la IBR. Astfel, este necesara confirmarea de laborator(teste ELISA pentru detectia anticorpilor BHV-1 in ser sau lapte, examene histopatologice, RT-PCR, izolarea virusului pe culturi celulare).

1. MATERIAL SI METODE

In LSVS Iasi - laboratorul de virusologie, in cadrul programului de supraveghere a evolutiei Rinotraheitei infectioase bovine, in anul 2007 s-au analizat 206 probe de ser prin tehnica Elisa - Kit Testare Anticorpi IBR gB(majoritatea bovine examinate provin din UE: Cehia, Olanda, Germania, Ungaria) si 6 probe de creier si organe provenite de la bovine reactionate ELISA pozitiv la IBR-IPV (confirmate ulterior de IDSA Bucuresti), prin examen histologic.

Pentru diagnosticul rinotraheitei infectioaea bovine s-au efectuat examene serologice pe probe de ser (ELISA), bacteriologice din organe interne, toxicologice si histologice..

Examenul histopatologic a fost efectuat pe fragmente de pulmon, rinichi, ficat si sistem nervos central provenite de la 6 bovine. Fragmentele de tesut nervos au fost fixate in formol salin 10%, incluse in parafina, sectionate la 5 ╬╝m si colorate prin metodele HEA, PAS. Testul imunoenzimatic(ELISA) pentru detectia anticorpilor specifici anti virusul rinotraheitei bovine ( BHV-1) in ser, plasma sau lapte bovin utilizeaza anticorpi monoclonali specifici anti IBR gB.

Testul ELISA detecteaza raspunsul in anticorpi indus si de vaccinuri marker anti IBR care contin glicoproteina B ( gB ). A fost configurat un format de titrare in microplaca prin imobilizarea antigenelor virale IBR pe placa. In urma incubarii probei de testat in placa captusita cu antigene, anticorpii anti IBR formeaza un complex cu antigenele virale imobilizate. Dupa spalarea materialelor nelegate in godeuri, se adauga un conjugat anticorp monoclonal anti IBR gB cu peroxidaza care nu se va lega la antigenul BHV-1 in cazul in care determinantii antigenici recunoscuti de anticorpul monoclonal au fost ocupati ( blocati ) de anticorpii din proba de testat. Ulterior, conjugatul nelegat este indepartat prin spalare si se adauga o solutie de substrat/cromogen. In prezenta enzimei, substratul este transformat intr-un produs care reactioneaza cu cromogenul si genereaza o culoare albastra. La adaugarea solutiei de spalare, apare o culoare galbena. Se masoara absorbanta la lungime de unda unica de 450 nm ( A450 nm) sau cu lungime de unda duala, la 450 si 620 nm, la un cititor automat de microplaci. Procentul de blocare al probelor este calculat utilizand absorbanta A450 nm sau A 450/620 nm a probei de testat in raport cu absorbanta unui ser negativ de control.

REZULTATE OBTINUTE

Bovinele adulte (vacile de lapte) afectate, din ferma SC "P" SRL, prezentau urmatoarele semne clinice: hipertermie, jetaj seros sau jetaj mucopurulent cu miros fetid, salivtie abundenta, conjunctivita cu epifora, respiratie accelerata, dispneica, uneori bucala. Unele prezentau tuse umeda si inflamatia tegumentului din regiunea botului. La necropsie s-au observat: bronhopneumonie in diferite stadii evolutive, zone de emfizem pulmonar extensiv, hemoragii, degenerarea organele parenchimatoase.

Bacteriologic, s-au evidentiat Staphylococus sp., Pasteurella spp si anaerobi doar la 2 bovine din pulmon netratate cu antibiotic. In literatura sunt semnalate, deasemeni, infectii genitale, necroze ovariene, mastite, mamite (Mc Gavin si Zachary, 2007). Fig.1. Taurine. Caz 1. Pneumonie lobara anteropulmonara. Emfizem pulmonar interlobular extensive in lobii diafragmateci. Fig. 2. Caz. Nr. 2. Vaca. Pulmon fata cardiaca. Brohopneumonie. Fig. 3. Caz nr. 3.. Brohopneumonie purulenta.

Viteii atinsi de boala din aceeasii ferma, erau cahectici, cu grave probleme respiratorii, cu dispnee, tuse si hipertermie 41.5grade C. Anatomopatologic, au prezentat constant leziuni ulcerative pe fondul congestionat al mucoaselor bucale si nazale. La un vitel in varsta de 2 luni s-a observat accentuata hiperemie a botului - "boala botului rosu" (asa cum este numita in literatura de specialitate), cheratita parenchimatoasa unilaterala, inflamatie fibrino-hemoragica, difteroida, purulenta ale mucoasei cailor respiratorii anterioare, cat si a celor digestive anterioare, precum si necroze si unele modificari erozive - ulcerative ale mucoaselor cavitati bucale, faringelui, si esofagului.

Mamei vitelului s-au prelevat probe de sange la care s-auefectuat Testul Elisa specific pentru detectia anticorpilor specifici anti virusul rinotraheitei bovine ( BHV-1) din ser, al carui rezultat a fost pozitiv. Ca si la animalele adulte, se descopera inflamatii catarale, hemoragice, fibrinohemoragice, difteroide, purulente sau gangrenoase, in functie de speciile microbiene care au participat la suprainfectie cu acumularea exsudatului si uneori concrementizarea lui si obstructia cailor respiratorii datorita careia se instaleaza dispneea. In pulmon se gaseste brohopneumonia de aspiratie in lobii anteriori cu aspect de hepatizatie si carnificatie, supuratie si infiltratie purulenta difuza, lichefierea tesutului pulmonar si uneori emfizem interstitial in lobii diafragmatici. In literatura sunt mentionate si alte leziuni viscerale: rumenita ulcerativa, enterita si hepatita multifocala la viteii nou nascuti, infectii sistemice la animalele tinere. In sistemul nervos central au fost prezente congestia meningelui si hemoragii punctiforme disseminate pe fata ventral a creierului.

Examenul histopatologic al creierului a evidentiat leziuni de meningoencefalita nesupurativa, mai frecventa si mai accentuata la animalele tinere. Ele au constat in: degenerari neuronale, (Fig. 4), glioza si infiltratii limfomonocitare cu putine granulocite neutrofile la debutul inflamatiei (Fig. 5), satelitoze, neuronofagii, noduli gliali si procese reparatorii gliocitare (Fig. 6). In unele cazuri, toate etajele sunt invadate de mononucleare (Fig. 7, Fig. 8, Fig. 9, Fig. 10), in altele celulele inflamatorii predomina in bulb si in cornul lui Ammon (Fig. 11, Fig. 12). In toate cazurile, vasele sunt afectate. In unele se observa congestie, fenomene de tromboza, transvazarea transsudatului cu formarea edemului perivascular si pericelular (Fig. 5, fig.17, fig. 21.), leucocitoza si diapedeza limfomonocitara (Fig. 14), proliferarea si migrarea microgliilor in jurul vaselor (Fig.15) si constituirea mansoanelor celulare perivasculare de diferite grosimi(Fig.16). Uneori sunt evidente fenomenele de activare, proliferare, stratificare a celulelor endoteliale (fig.18) care impreuna cu mansoanelor pot duce la obliterarea lumenului vascular (Fig.20). In apropierea vaselor afectate se gasesc focare de leucomalacie.

Incluziile virale intranucleare, acidofile, sunt decelabile in creierul de vitel la nivelul trunchiului cerebral (Fig.8, Fig.9, Fig.10) si al cornului lui Ammon (Fig.12), precum si in neuroni si celulele gliale (astrocite) din mansoanele perivasculare (Fig.20).
In literatura se specifica tropismul particular al unor tulpini virale pentru SNC.

In infectia experimentala, BHV-5 infecteaza si se replica in mucoasa nazala si apoi patrunde in SNC prin transport axonal retrograd utilizand nervii trigemeni si olfactivi. Virusul poate ramane latent in celulele ganglionare nervoase producand recrudescente dupa stress sau imunosupresie. Infectia virala respiratorie se complica cu diversi germeni, infectia sinergica cu Mannheimia haemolytica producand pneumonie. (Mc Gavin si Zacharay, 2007).

2. Concluzii

1. La necropsie, leziunile predominante evidentiate au fost: bronhopneumonie in diferite stadii evolutive(inclusiv purulenta), zone de emfizem pulmonar extensiv, hemoragii, degenerarea organele parenchimatoase, iar la un vitel s-a observat o accentuata hiperemie a botului - "boala botului rosu", cheratita parenchimatoasa unilaterala, inflamatie fibrino-hemoragica, difteroida, purulenta ale mucoasei cailor respiratorii anterioare, cat si a celor digestive anterioare, precum si necroze si unele modificari erozive - ulcerative ale mucoaselor cavitati bucale, faringelui, si esofagului.

2. Examenul histopatologic al creierului a evidentiat leziuni de meningoencefalita nesupurativa, mai accentuata la animalele tinere. In unele cazuri, substanta alba este invadata aproape in totalitate de mononucleare, in altele celulele inflamatorii predomina in substanta nervoasa din bulb sau din cornul lui Ammon.

3. In toate cazurile sunt prezente tromboza, edemul perivascular si pericelular, glioza, diapedeza limfomonocitara, mansoanele celulare perivasculare de diferite grosimi si nodulii gliali.

4. Incluziile virale intranucleare, acidofile, au fost evidentiate in neuronii din trunchiul cerebral si cornul lui Ammon, precum si in celulele gliale din mansoanele perivasculare

BIBLIOGRAFIE

A few morphological aspects in the infectious bovine Rhinotracheitis 

Autori: 

Stefania MERTICARIU-ANDERCO - LSVS Iasi, 

Gabriela URSACHI - LSVS Iasi,