Inseminarea artificiala la Porci - partea 2

1.2. Suportul de stocare amaterialului seminal

Mediul lichid de stocare a materialuluiseminal de vier are un rolul esențial pentru a prelungi timpul de supraviețuire a spermatozoizilor, pentru a furniza energia necesara celulelor, pentru asigura pH-ul suspensiei si pentru a evita dezvoltarea bacteriilor. Prin urmare,acest mediu lichid utilizat pentru materialul seminal contine ioni pentru amentine presiunea osmotica a mediului, glucoza ca sursa de energie, sisteme de tampon pentru stabilizarea pH-ului si antibiotice pentru a preveni cresterea exagerata a bacterilor. Prezenta glucozeic a singura sursa de energie, precum si continutul de oxigen scazut in care materialul seminal este diluat si pastrat stimuleaza metabolismul glicolitic. In consecinta, pH-ul intracelular al spermatozoizilor este redus, ceea ce reduce motilitatealor si le permite sa supravietuiasca cateva zile, la temperatura ambianta. Glucoza, de asemenea, contribuie, in mare masura la echilibrul osmotic. Ionii din mediul lichid utilizat pentru materialul seminal de vier sunt furnizați de bicarbonat de sodiu si citratde sodiu, substanțe utilizate ca tampon. De asemenea se mai adauga KCl pentru a preveni pierderea de potasiu din interiorul celulelor si pierderea ulterioara a motilitatii din cauza ineficientei pompei Na-K de la nivelul membranei citoplasmatice. Spermatozoizii porcinelor sunt detoleranți la modificari minore in osmolaritatea soluției. Sunt preferate mediile iso-osmotic si usor hiper-osmoticpentru conservarea optima a capacitaților de fertilizare. Depozitarea in medii cu osmolaritate sub 250 mOsm si peste 300mOsm duc la deteriorarea ireversibila a membranelor si pierderea ulterioara amotilitații spermatozoizilor. EDTA se poate adauga pentru proprietatile sale de chelare. Atunci cand ionii de Ca-sunt capturați, procesul de capacitare a spermatozoizilor este inhibat. In consecinta, capacitatea de fertilizare a spermatozoizilor este pastrata. In functie de compozitia diluantului, materialul seminal poate fi stocat timp de 2 pana la 3 zile pe termen scurt iar utilizand soluții speciale prelungitoare poate fi stocat si pana la 5 zile sau mai mult. Substanțele prelungitoare conțin sisteme complexe de tamponare (Hepes, Tris), in plus fata de sistemul de tamponare bicarbonat si de conțin albumina serica bovina (BSA). Acesta din urma are o influenta pozitiva asupra supravietuirii spermatozoizilor. Cisteina este folosita ca un stabilizator membrana si la inhibarea funcției de capacitare a spermatozoizilor.

Bacteriile din sperma provin in cea mai mare parte din prepuțul vierului, prin urmare concentrația acestora poate creste sau scade in functie de tehnica de colectare a materialului seminal, de manipulare sau de apa folosita la prepararea diluantului materialului seminal. In funcție de specie, bacteriile au efecte nocive asupra calitații materialului seminal, motilitatii prin modificari ale mediului, moartea celulelor si aglutinare fie prin efect direct asupra spermatozoizilor sau prin acidifierea mediului.

Legislația europeana prevede o combinatie de antibiotic echivalent cu 500 UI / ml penicilina, 500 UI / ml streptomicina, 150 mg / ml lincomicina si 300 mg / ml spectinomicina, pentru a avea un spectru larg antibacterian fiind activ si fața de Leptospira. in practica, in cele mai comercializate diluante de utilizeaza aminoglicozide, in special gentamicina. Cu toate acestea, contaminarea bacteriena ar trebui sa fie mai intai redusa la minimum prin masuri drastice de igiena, aplicarea de reguli de buna practica cu acordarea unei atenții deosebite la starea de sanatate si salubritate generala a personalului laboratorului. in diluant de utilizeaza apa distilata sau deionizata. inainte de a ne asigura de lipsa bacteriilor din apa calitatea fizicochimica a apei este esențiala si mai ales continutul de electrolit, in special lipsa de ionilor de calciu, este o caracteristica importanta pentru apa utilizata in diluant.

1.3. Materialul seminal porcin in stare congelata

Dupa cum s-a mentionat mai sus, spermatozoizii porcini sunt deosebit de sensibili la temperaturi joase si la racirea rapida, datorita compozitiei specifice ale membranei celulare. socul la rece poate fi rezolvat din punct de vedere tehnic prin inducerea de rezistenta la rece, incubarea spermei la temperatura ambianta, timp de cateva ore, existența plasmei seminale care are un efect protector asupra spermatozoizilor, impreuna cu controlul atent al protocoalelor de congelare. Cu toate acestea, congelarea materialului seminal de vier este greu de realizat. Dezghetarea dozei de material seminal este un alt punct de ingrijorare. Decongelarea trebuie sa fie rapida pentru a mentine motilitatea spermatozoizilor si integritatea acrosomilor. Ambele procese, inghetarea si dezghetarea, au ca rezultat modificari in membrana plasmatica fiind necesare diverse protocoale de lucru. Totusi prin utilizarea unor medii elaborate rezultatele fertilizarilor cu material seminal congelat s-au imbunatațit. Cu toate acestea, congelarea si decongelare sunt procese consumatoare de timp, de limitare a utilizarii materialului seminal congelat pentru anumite indicatii, cum ar fi timpii de transport lungi si conservarea materialului genetic valoros.

2. STRATEGII DE INSEMINARE

In gestionarea IA este foarte important sa se determine succesul procedurii si performanta de reproducere a scroafelor. Caldurile de control, datele si numarul de inseminari, tehnica de IA, depozitarea materialului seminal la ferma si utilizarea noilor tehnologii IA, toate necesita cunostinte de fiziologie de reproducere a porcului. Urmatoarele masuri ar putea fi luate in cosiderare pentru a optimiza eficienta de IA privind efectivele de porci.

2.1. Stimularea scoafelor

Calendarul incorect de inseminare presupune detectarea atenta a estrului la intervale regulate. Vierii stimulatori sunt frecvent utilizați in promovarea dezvoltarii foliculare si manifestare a comportamentului estral (Langendijk, 2006). in plus, un nivel ridicat de stimuli produsi de vier creste frecventa contractiilor uterine, avand un rol de sustinere pentru transportul pasiv al spermei prin coarnele uterine la momentul de inseminarii. Acest efect poate fi doar partial imitat de un porc tester robot care emite semnale olfactive, acustice si vizuale de vier (Gerritsen al, 2005.). Cresterea concentratiilor plasmatice a oxitocinei in sangele periferic apare ca raspuns imediat la prezenta vierului si dureaza timp de aproximativ 10 min.

2.2. Perioada de inseminare

Multe studii au investigat in timp, relatiile dintre estru, ovulatie, inseminare si fertilizare utilizand examinarea cu ultrasunete. Observatia cheie este faptul ca ovulatia are loc la inceputul ultimei treimi a estrului, indiferent de durata totala a estrului. O precisa predictie a timpului de ovulație spontana la scroafe nu a fost inca realizata. Cu toate acestea, predictia duratei estrului prin observarea debutul estrului dupa ințarcare este utilizata in practica. IA ar trebui sa fie programata cat mai aproape de ovulație, de preferinta in termen de 12 - 24 h inainte de ovulatie. Beneficiul examinarii cu ultrasunete a morfologiei ovarului pentru gestionarea fertilitatii la porc a fost demonstrata ca avand o mare eficiența in practica (Jong, 2009). Determinarea timpului de ovulatie in ceea ce priveste comportamentul estral si gestionarea IA la un numar reprezentativ de scroafe si in zile consecutive, are un mare potential de a oferi avantaje in calendarul AI si posibilitatea de a dezvolta strategii de management al reproducției, specifice pentru imbunatatirea IA.

2.3. Utilizarea noilor tehnologii IA

Dezvoltarea de tehnici pentru a insemina cu un numar redus de spermatozoizi intr-un mic volum a crescut eficienta inseminarii la porc. Acest lucru este deosebit de interesant atunci cand se utilizeaza spermatozoizi de mare valoare, care au fost afectați de exemplu de congelare si decongelare sau sex-sortare. Inseminarea post-col uterin sau cu mai multe dispozitive intrauterine a fost dezvoltata pentru a traversa colul uterin si pentru a depozita sperma in corpul uterin sau cornul posterior la scroafele multipare. Comparativ cu standardul transcervical IA de col uterin, tehnica de IA post-col uterin permite o semnificativa reducere a numarului de spermatozoizi care urmeaza sa fie inseminați, intrucat IA profund intrauterin permite reducerea de la 5 la 20 ori. Limitarile metodei se refera la competentele necesare pentru manipularea cateterelor precum si apariția posibilitații de a deteriora țesutul cervical sau uterin. Utilizarea de material seminal incapsulat intr-o membrana de alginat de bariu a fost demonstrata ca permite o singura inseminare. Laparoscopia ofera posibilitatea de a insemina un numar foarte redus de spermatozoizi (de exemplu 0,3 x 106) in oviduct la scroafele anesteziate.